Biochimica applicata

A.A. 2018/2019
Insegnamento per
8
Crediti massimi
72
Ore totali
SSD
BIO/10
Lingua
Italiano
Obiettivi formativi
- Lo scopo finale del corso è di fornire agli studenti le nozioni di base per un approccio analitico ai diversi problemi che si incontrano nei laboratori di ricerca sia di base che applicata
- L'obiettivo principale del corso è di illustrare le basi teoriche (56 ore di lezione frontale) e pratiche (16 ore di laboratorio) delle tecniche più avanzate utilizzate nella ricerca biomedica e le loro principali applicazioni
- Le metodiche sono presentate e discusse criticamente per mettere in evidenza potenzialità, limiti e complementarietà
- I contenuti del corso sono costantemente aggiornati per formare figure professionali che possano inserirsi in un laboratorio biomedico con una preparazione teorica idonea all'impiego pratico delle metodologie più moderne

Struttura insegnamento e programma

Linea AK
Edizione attiva
Responsabile
BIO/10 - BIOCHIMICA - CFU: 8
Esercitazioni: 16 ore
Lezioni: 56 ore
Programma
Durante il corso verranno illustrati i seguenti argomenti:
Spettrofotometria UV-Visibile: Richiami sulla natura delle radiazioni elettromagnetiche. Spettrofotometria UV-VIS (principi, strumentazione ed applicazioni). Spettri di assorbimento. Legge di Lambert-Beer e sue applicazioni quantitative, il concetto di retta di calibrazione. Dosaggio spettrofotometrico della concentrazione proteica. Applicazione della spettrofotometria nei dosaggi enzimatici
Tecniche cromatografiche per la purificazione, separazione, identificazione e analisi quantitativa di molecole a basso (metaboliti, farmaci, ormoni, etc.) ed elevato (acidi nucleici e proteine) PM: Principi generali. Cenni sulla TLC. Cromatografia a scambio ionico. Cromatografia ad esclusione, Cromatografia di affinità. HPLC e GC (fasi stazionarie, rivelatori e principali applicazioni).
Tecniche elettroforetiche: Principi generali. Elettroforesi zonale su acetato di cellulosa; proteine sieriche. Elettroforesi su gel: agarosio, poliacrilamide gel elettroforesi (PAGE e SDS-PAGE). Isoelettrofocalizzazione (IEF). Elettroforesi bidimensionale. Metodi di rivelazione e valutazioni quantitative (colorazioni "in gel" e in seguito a blotting). Elettroforesi capillare.
Tecniche di spettrometria di massa per l'analisi qualitativa e quantitativa di molecole a basso (metaboliti, farmaci, ormoni, etc.) ed elevato (acidi nucleici e proteine) PM: Principi generali e strumentazione (sorgenti e analizzatori)
Tecniche per lo studio delle proteine: metodi per il sequenziamento, la determinazione della struttura secondaria e terziaria, e delle modificazioni post-traduzionali e mutazioni. Cenni di proteomica
Tecniche di biologia molecolare: concetti di base della biologia molecolare. DNA ricombinante (vettori, enzimi di restrizione ed altri enzimi, purificazione di DNA plasmidico, ottenimento e screening di libraries). Sequenziamento del DNA. Metodi per lo studio della trascrizione e dell'espressione genica (livelli di mRNA, attività trascrizionale di promotori). Metodi per lo studio dell'interazione tra macromolecole (DNA-proteine, proteina-proteina). Polymerase chain reaction (PCR) e real time PCR: principi e applicazioni.
Metodi di marcatura di molecole biologiche: Richiami sui tipi di decadimento radioattivo. Energia e velocità del decadimento radioattivo. Rivelazione e misura della radioattività mediante scintillazione. Autoradiografia. Marcatura con sistemi non radioattivi.
Colture cellulari e tecniche per il frazionamento cellulare
Tecniche immunochimiche e immunometriche: richiami sulla struttura degli anticorpi e sulla reazione antigene-anticorpo. Immunoprecipitazione in fase libera ed in gel. Saggi di immunodiffusione e agglutinazione. Dosaggi radioimmunologici e immunoenzimatici, metodi turbidimetrici e nefelometrici.
Esercitazioni in laboratorio didattico
Il corso include esercitazioni pratiche in laboratorio obbligatorie su alcuni degli argomenti trattati nel corso e prevede una relazione individuale.
Informazioni sul programma
I corsi si svolgono nel primo semestre del terzo anno di corso con il medesimo programma.
La frequenza alle esercitazioni in laboratorio è obbligatoria ai fini dell'ammissione all'esame; viene richiesta una relazione scritta sulle attività di laboratorio svolte.
Non sono previste verifiche in itinere. Durante il corso verranno dedicate alcune lezioni alla risoluzione di testi d'esame.
Gli studenti si ricevono presso il Dipartimento di Scienze Farmacologiche e Biomolecolari (DiSFeB) in Via Balzaretti 9, previo appuntamento telefonico o via e-mail.
Prerequisiti e modalità di esame
Per sostenere l'esame gli studenti devono aver superato gli esami di Biochimica e Chimica organica I.

L'esame consiste in una prova scritta.
In particolare si articola in due parti: due problemi tratti dalla letteratura scientifica e due domande aperte sugli argomenti trattati nel corso. Il tempo a disposizione per tale prova è di 2 ore. Il giudizio finale terrà conto anche della relazione individuale sull'attività svolte in laboratorio.
Materiale didattico e bibliografia
Il materiale iconografico mostrato durante le lezioni è scaricabile dal portale Ariel.
Nel portale Ariel sono disponibili un eserciziario che raccoglie i temi di esame più recenti e le risoluzioni di alcuni problemi.
Possono essere consultati i seguenti testi:
Metodologie di base per le scienze biomolecolari - Reed R, Holmes D, Weyers J, Jones A - Zanichelli ed., ultima edizione
Metodologie di base per la biochimica e la biotecnologia - Ninfa AJ, Ballou DP - Zanichelli ed., ultima edizione
I principi di biochimica di Lehninger - Nelson & Cox - Zanichelli ed., ultima edizione
Periodo
Primo semestre
Linea LZ
Edizione attiva
Responsabile
BIO/10 - BIOCHIMICA - CFU: 8
Esercitazioni: 16 ore
Lezioni: 56 ore
Docente: Mitro Nico
Periodo
Primo semestre
Periodo
Primo semestre
Modalità di valutazione
Esame
Giudizio di valutazione
voto verbalizzato in trentesimi
Docente/i
Ricevimento:
Previo appuntamento telefonico 02503 18323 o email
Dipartimento di Scienze Farmacologiche e Biomolecolari
Ricevimento:
Su appuntamento telefonico o e-mail
Via Balzaretti 9, 20113 Milano