Metodologie di citochimica
A.A. 2019/2020
Obiettivi formativi
L'insegnamento ha lo scopo di fornire allo studente i principi fondamentali della citochimica e dell'istochimica. Verranno illustrate le tecniche di preparazione per l'analisi di campioni utilizzati nell'analisi citochimica, istochimica, Immunocitochimica e di ibridazione in situ. Verranno inoltre fornite le conoscenze di base per la visualizzazione, a livello ottico ed elettronico, di macromolecole di interesse biologico. Le lezioni teoriche saranno associate a seminari/workshops relativi ad esempi di applicazione di questi metodi allo studio di problemi di biologia cellulare e di strumenti di osservazione dei preparati.
Risultati apprendimento attesi
Al termine del corso, lo studente avrà acquisito conoscenze teoriche di base relative a:
- principali tecniche di preparazione di campioni istologici e di colorazione cito-istochimica;
- principali tecniche di immunoistochimica e di ibridazione in situ;
- principali metodi di osservazione in situ di macromolecole biologiche in cellule e tessuti
- principali tecniche di preparazione di campioni istologici e di colorazione cito-istochimica;
- principali tecniche di immunoistochimica e di ibridazione in situ;
- principali metodi di osservazione in situ di macromolecole biologiche in cellule e tessuti
Periodo: Secondo semestre
Modalità di valutazione: Esame
Giudizio di valutazione: voto verbalizzato in trentesimi
Corso singolo
Questo insegnamento non può essere seguito come corso singolo. Puoi trovare gli insegnamenti disponibili consultando il catalogo corsi singoli.
Programma e organizzazione didattica
Edizione unica
Responsabile
Programma
Gli strumenti di osservazione microscopica. Principi di ottica geometrica. Formazione dell'immagine. Lenti d'ingrandimento. Microscopio composto. Illuminazione dell'oggetto.
Oltre l'ottica geometrica: natura ondulatoria della luce, fenomeni di interferenza e diffrazione.
Potere risolutivo di un dispositivo ottico.
Tecniche "speciali" in microscopia ottica: campo chiaro, campo scuro, contrasto di fase, luce polarizzata. Fluorescenza e microscopia in fluorescenza. Spettroscopia di fluorescenza. Fluorocromi. Applicazioni della microscopia in fluorescenza (FRAP, FLIP, FRET, BRET). Principi e strumenti della microscopia confocale. Microscopia Super-resolution. Microscopia elettronica.
Tecniche di allestimento di campioni biologici in microscopia ottica: metodi di prelievo, metodi fisici e chimici di fissazione, inclusione in paraffina e in resine plastiche, sezionamento e strumenti relativi. Colorazione delle sezioni per l'osservazione al microscopio ottico.
Coloranti: struttura e classificazione chimica. Cromofori e auxocromi. Metacromasia. Colorazioni istomorfologiche. Colorazioni citochimiche. Colorazioni immunoistochimiche. Ibridazione in situ.
Tecniche di allestimento di campioni biologici per l'analisi al microscopio elettronico.
Citofluorimetria a flusso: principi di base, strumentazione, preparazione dei campioni, gestione ed analisi dei dati. Applicazioni della citometria a flusso nella ricerca di base e applicata.
Principi di base della citometria di massa CyTOF. Applicazioni della citometria di massa CyTOF nella ricerca di base e applicata.
Oltre l'ottica geometrica: natura ondulatoria della luce, fenomeni di interferenza e diffrazione.
Potere risolutivo di un dispositivo ottico.
Tecniche "speciali" in microscopia ottica: campo chiaro, campo scuro, contrasto di fase, luce polarizzata. Fluorescenza e microscopia in fluorescenza. Spettroscopia di fluorescenza. Fluorocromi. Applicazioni della microscopia in fluorescenza (FRAP, FLIP, FRET, BRET). Principi e strumenti della microscopia confocale. Microscopia Super-resolution. Microscopia elettronica.
Tecniche di allestimento di campioni biologici in microscopia ottica: metodi di prelievo, metodi fisici e chimici di fissazione, inclusione in paraffina e in resine plastiche, sezionamento e strumenti relativi. Colorazione delle sezioni per l'osservazione al microscopio ottico.
Coloranti: struttura e classificazione chimica. Cromofori e auxocromi. Metacromasia. Colorazioni istomorfologiche. Colorazioni citochimiche. Colorazioni immunoistochimiche. Ibridazione in situ.
Tecniche di allestimento di campioni biologici per l'analisi al microscopio elettronico.
Citofluorimetria a flusso: principi di base, strumentazione, preparazione dei campioni, gestione ed analisi dei dati. Applicazioni della citometria a flusso nella ricerca di base e applicata.
Principi di base della citometria di massa CyTOF. Applicazioni della citometria di massa CyTOF nella ricerca di base e applicata.
Prerequisiti
Conoscenze basilari di citologia, istologia, e chimica biologica.
Metodi didattici
L'insegnamento consisterà di lezioni frontali e seminari di approfondimento degli argomenti trattati. Le lezioni comprenderanno la presentazione di diapositive PowerPoint preparate dal docente e, quando necessari, spiegazioni alla lavagna. Agli studenti saranno anche distribuite copie di articoli recenti pubblicati su riviste internazionali e inerenti alle tematiche affrontate. Questi articoli saranno anche disponibili in formato pdf sul sito web del docente.
Modalità di frequenza: fortemente consigliata.
Modalità di frequenza: fortemente consigliata.
Materiale di riferimento
Testi consigliati:
A.G.E. Pearse, Istochimica. Teoria e pratica, Piccin.
E. Bonucci, Manuale di Istochimica, Lombardo.
K.M. Polak and S. Van Noorden, Introduction to Immunocytochemistry.
A.G.E. Pearse, Istochimica. Teoria e pratica, Piccin.
E. Bonucci, Manuale di Istochimica, Lombardo.
K.M. Polak and S. Van Noorden, Introduction to Immunocytochemistry.
Modalità di verifica dell’apprendimento e criteri di valutazione
L'esame consiste in una prova scritta con domande a risposta aperta sugli argomenti trattati. Il tempo a disposizione per completare la prova è di 2 ore.
BIO/16 - ANATOMIA UMANA - CFU: 6
Lezioni: 36 ore
Lezioni (seminario): 12 ore
Lezioni (seminario): 12 ore
Docenti:
Ricciardi Sara, Rolando Chiara
Turni:
Docente/i
Ricevimento:
su richiesta, via email
via G. Celoria, 26 20133 Milano, torre A, sesto piano