Metodologie di citochimica
A.A. 2022/2023
Obiettivi formativi
L'insegnamento ha lo scopo di fornire allo studente i principi fondamentali della citochimica e dell'istochimica. Verranno illustrate le tecniche di preparazione per l'analisi di campioni utilizzati nell'analisi citochimica, istochimica, Immunocitochimica e di ibridazione in situ. Verranno inoltre fornite le conoscenze di base per la visualizzazione, a livello ottico ed elettronico, di macromolecole di interesse biologico. Le lezioni teoriche saranno associate a seminari/workshops relativi ad esempi di applicazione di questi metodi allo studio di problemi di biologia cellulare e di strumenti di osservazione dei preparati.
Risultati apprendimento attesi
Al termine del corso, lo studente avrà acquisito conoscenze teoriche di base relative a:
- principali tecniche di preparazione di campioni istologici e di colorazione cito-istochimica;
- principali tecniche di immunoistochimica e di ibridazione in situ;
- principali metodi di osservazione in situ di macromolecole biologiche in cellule e tessuti
- principali tecniche di preparazione di campioni istologici e di colorazione cito-istochimica;
- principali tecniche di immunoistochimica e di ibridazione in situ;
- principali metodi di osservazione in situ di macromolecole biologiche in cellule e tessuti
Periodo: Secondo semestre
Modalità di valutazione: Esame
Giudizio di valutazione: voto verbalizzato in trentesimi
Corso singolo
Questo insegnamento non può essere seguito come corso singolo. Puoi trovare gli insegnamenti disponibili consultando il catalogo corsi singoli.
Programma e organizzazione didattica
Edizione unica
Responsabile
Periodo
Secondo semestre
Programma
Gli strumenti di osservazione microscopica. Principi di ottica geometrica.
Oltre l'ottica geometrica: natura ondulatoria della luce, fenomeni di interferenza e diffrazione. Potere risolutivo di un dispositivo ottico.
Tecniche "speciali" in microscopia ottica: campo chiaro, campo scuro, contrasto di fase. Applicazioni nella ricerca di base e applicata.
Fluorescenza e microscopia in fluorescenza. Spettroscopia di fluorescenza. Fluorocromi. Principi e strumenti della microscopia confocale. Applicazioni della microscopia in fluorescenza (FRAP, FLIP, FRET, BRET).
Microscopia elettronica. Microscopia crioelettronica (cryo-EM).
Tecniche di allestimento di campioni biologici in microscopia ottica: metodi di prelievo, metodi fisici e chimici di fissazione, inclusione in paraffina e in resine plastiche, sezionamento e strumenti relativi. Colorazione delle sezioni per l'osservazione al microscopio ottico. Coloranti: struttura e classificazione chimica. Cromofori e auxocromi. Metacromasia. Colorazioni istomorfologiche. Colorazioni citochimiche. Colorazioni immunoistochimiche. Ibridazione in situ.
Tecniche di allestimento di campioni biologici per l'analisi al microscopio elettronico.
ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay): principi di base, preparazione dei campioni, analisi dei dati. Applicazioni del saggio ELISA nella ricerca di base e applicata.
Citofluorimetria a flusso: principi di base, strumentazione, preparazione dei campioni, gestione ed analisi dei dati. Applicazioni della citometria a flusso nella ricerca di base e applicata.
Principi di base della citometria di massa CyTOF. Applicazioni della citometria di massa CyTOF nella ricerca di base e applicata.
Oltre l'ottica geometrica: natura ondulatoria della luce, fenomeni di interferenza e diffrazione. Potere risolutivo di un dispositivo ottico.
Tecniche "speciali" in microscopia ottica: campo chiaro, campo scuro, contrasto di fase. Applicazioni nella ricerca di base e applicata.
Fluorescenza e microscopia in fluorescenza. Spettroscopia di fluorescenza. Fluorocromi. Principi e strumenti della microscopia confocale. Applicazioni della microscopia in fluorescenza (FRAP, FLIP, FRET, BRET).
Microscopia elettronica. Microscopia crioelettronica (cryo-EM).
Tecniche di allestimento di campioni biologici in microscopia ottica: metodi di prelievo, metodi fisici e chimici di fissazione, inclusione in paraffina e in resine plastiche, sezionamento e strumenti relativi. Colorazione delle sezioni per l'osservazione al microscopio ottico. Coloranti: struttura e classificazione chimica. Cromofori e auxocromi. Metacromasia. Colorazioni istomorfologiche. Colorazioni citochimiche. Colorazioni immunoistochimiche. Ibridazione in situ.
Tecniche di allestimento di campioni biologici per l'analisi al microscopio elettronico.
ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay): principi di base, preparazione dei campioni, analisi dei dati. Applicazioni del saggio ELISA nella ricerca di base e applicata.
Citofluorimetria a flusso: principi di base, strumentazione, preparazione dei campioni, gestione ed analisi dei dati. Applicazioni della citometria a flusso nella ricerca di base e applicata.
Principi di base della citometria di massa CyTOF. Applicazioni della citometria di massa CyTOF nella ricerca di base e applicata.
Prerequisiti
Conoscenze basilari di citologia, istologia, e chimica biologica.
Metodi didattici
L'insegnamento consisterà di lezioni frontali e seminari di approfondimento degli argomenti trattati. Le lezioni comprenderanno la presentazione di diapositive PowerPoint preparate dal docente. Agli studenti saranno anche distribuite copie di articoli recenti pubblicati su riviste internazionali e inerenti alle tematiche affrontate. Questi articoli saranno anche disponibili in formato pdf sul sito web del docente.
Modalità di frequenza: fortemente consigliata.
Modalità di frequenza: fortemente consigliata.
Materiale di riferimento
Testi consigliati:
A.G.E. Pearse, Istochimica. Teoria e pratica, Piccin.
A.G.E. Pearse, Istochimica. Teoria e pratica, Piccin.
Modalità di verifica dell’apprendimento e criteri di valutazione
L'esame consiste in una prova scritta con domande a risposta aperta sugli argomenti trattati. Il tempo a disposizione per completare la prova è di 90 minuti.
Siti didattici
Docente/i