Metodologie di citochimica

A.A. 2021/2022
6
Crediti massimi
48
Ore totali
SSD
BIO/16
Lingua
Italiano
Obiettivi formativi
L'insegnamento ha lo scopo di fornire allo studente i principi fondamentali della citochimica e dell'istochimica. Verranno illustrate le tecniche di preparazione per l'analisi di campioni utilizzati nell'analisi citochimica, istochimica, Immunocitochimica e di ibridazione in situ. Verranno inoltre fornite le conoscenze di base per la visualizzazione, a livello ottico ed elettronico, di macromolecole di interesse biologico. Le lezioni teoriche saranno associate a seminari/workshops relativi ad esempi di applicazione di questi metodi allo studio di problemi di biologia cellulare e di strumenti di osservazione dei preparati.
Risultati apprendimento attesi
Al termine del corso, lo studente avrà acquisito conoscenze teoriche di base relative a:
- principali tecniche di preparazione di campioni istologici e di colorazione cito-istochimica;
- principali tecniche di immunoistochimica e di ibridazione in situ;
- principali metodi di osservazione in situ di macromolecole biologiche in cellule e tessuti
Programma e organizzazione didattica

Edizione unica

Responsabile
Periodo
Secondo semestre
In relazione alle modalità di erogazione delle attività formative per l'a.a. 2021/22, verranno date indicazioni più specifiche nei prossimi mesi, in base all'evoluzione della situazione sanitaria.
Programma
Gli strumenti di osservazione microscopica. Principi di ottica geometrica. Formazione dell'immagine. Lenti d'ingrandimento. Microscopio composto. Illuminazione dell'oggetto.
Oltre l'ottica geometrica: natura ondulatoria della luce, fenomeni di interferenza e diffrazione.
Potere risolutivo di un dispositivo ottico.
Tecniche "speciali" in microscopia ottica: campo chiaro, campo scuro, contrasto di fase, luce polarizzata. Fluorescenza e microscopia in fluorescenza. Spettroscopia di fluorescenza. Fluorocromi. Applicazioni della microscopia in fluorescenza (FRAP, FLIP, FRET, BRET). Principi e strumenti della microscopia confocale. Microscopia Super-resolution. Microscopia elettronica.

Tecniche di allestimento di campioni biologici in microscopia ottica: metodi di prelievo, metodi fisici e chimici di fissazione, inclusione in paraffina e in resine plastiche, sezionamento e strumenti relativi. Colorazione delle sezioni per l'osservazione al microscopio ottico.
Coloranti: struttura e classificazione chimica. Cromofori e auxocromi. Metacromasia. Colorazioni istomorfologiche. Colorazioni citochimiche. Colorazioni immunoistochimiche. Ibridazione in situ.
Tecniche di allestimento di campioni biologici per l'analisi al microscopio elettronico.

Citofluorimetria a flusso: principi di base, strumentazione, preparazione dei campioni, gestione ed analisi dei dati. Applicazioni della citometria a flusso nella ricerca di base e applicata.
Principi di base della citometria di massa CyTOF. Applicazioni della citometria di massa CyTOF nella ricerca di base e applicata.
Prerequisiti
Conoscenze basilari di citologia, istologia, e chimica biologica.
Metodi didattici
L'insegnamento consisterà di lezioni frontali e seminari di approfondimento degli argomenti trattati. Le lezioni comprenderanno la presentazione di diapositive PowerPoint preparate dal docente e, quando necessari, spiegazioni alla lavagna. Agli studenti saranno anche distribuite copie di articoli recenti pubblicati su riviste internazionali e inerenti alle tematiche affrontate. Questi articoli saranno anche disponibili in formato pdf sul sito web del docente.
Modalità di frequenza: fortemente consigliata.
Materiale di riferimento
Testi consigliati:
A.G.E. Pearse, Istochimica. Teoria e pratica, Piccin.
Modalità di verifica dell’apprendimento e criteri di valutazione
L'esame consiste in una prova scritta con domande a risposta aperta sugli argomenti trattati. Il tempo a disposizione per completare la prova è di 2 ore.
BIO/16 - ANATOMIA UMANA - CFU: 6
Lezioni: 36 ore
Lezioni (seminario): 12 ore
Docente/i
Ricevimento:
Su appuntamento, stefano.biffo@unimi.it
c.o. DBS, via Celoria 26; aula virtuale
Ricevimento:
Su appuntamento, sara.ricciardi@unimi.it
c.o. DBS, Via Celoria 26